■ 产品介绍
AH109菌株来源于PJ69-2A 酵母菌株，将lacZ报告基因引入PJ69-2A诞生了AH109，此菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为：trp1，leu2，报告基因为：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1。AH109-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1~174位氨基酸区段的DNA结合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成 bait融合蛋白(bait–BD)和 prey融合蛋白 (prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。AH109有四个报告基因：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子(GAL1，GAL2，MEL1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。 |
基因型： | MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3, MEL1 GAL2UAS- GAL2TATA-ADE2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ |
■ 基本信息
培养基: | YPDA |
菌株类别: | 酵母菌 |
培养条件: | 28℃，有氧，YPDA |
质粒转化: | 化转、电转 |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本应用: | 酵母双杂交 |
■ 使用方法
建议超净台内划线涂板，得到单克隆后再进行其他实验操作，避免杂菌污染。
■ 注意事项
1. 本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 使用甘油菌时可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可，也可完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，菌株的活力会逐渐下降。
