■ 产品介绍
KM71H是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。 KM71H毕赤酵母被推荐用来表达含有Zeocin抗性的载体载体重组质粒，例如pPICZ A,B,C系列的载体。 在筛选KM71H重组转化菌株时，Zeocin抗生素的工作浓度是100μg/ml。 KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一个片段缺失，当pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C转化到KM71H中时只能产生出MutS转化株，不必在进行Mut基因型的筛选了。 KM71H的来源母细胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一个突变,这使得菌株无法在不含有精氨酸的培养基中生长。而KM71H酵母细胞中在AOX1基因处插入了一个正常的arg4基因，从而形成了KM71H的MutS, Arg+表型。 将约2kb的Arg4基因克隆出来后插入到KM71H来源菌株内的野生型的AOX1基因的BamH I（16bp）和Sal I（227bp）中间，从而构建成功KM71H。ARG4基因直接替换了AOX1基因的16-227片段序列。 KM71H毕赤酵母细胞的优点是不需要利用甲醇minimal media筛选菌株的Mut基因型，因为所有的转化株都是MutS菌株。另外，AOX1基因并没有被完全删除，理论上你可以用自己的基因替换其中的Arg4基因，从而生成MutS, Arg-的转化株，但是由于实验表明该基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生长，所以并不鼓励大家进行这种基因替换尝试。 |
基因型： | aox1::ARG4, arg4 |
■ 基本信息
培养基: | YPDA |
菌株类别: | 酵母菌 |
培养条件: | 28℃，有氧，YPDA |
质粒转化: | 电激 |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本应用: | 用于蛋白表达 |
备注: | 可参考 Invitrogen C18200 |
■ 使用方法
建议超净台内划线涂板，得到单克隆后再进行其他实验操作，避免杂菌污染。
■ 注意事项
1. 酵母菌在YPD培养基上会变粉，是正常现象，可以由此特性鉴别是否为酵母菌。
2. 酵母菌种化冻1-2次活性下降，不建议直接长期保存。
3. 活化保种的种管建议分装保存，反复冻融菌株活力下降。
4. 本产品仅可用于实验室研究，不能用于动物，人体以及作为食品添加剂等用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
