■ 产品介绍

菌株为生孢梭菌，冻存管磁珠保存。

培养条件：哥伦比亚血琼脂，35℃厌氧培养 48-72 小时。保存温度：2-8℃。如需保存，则挑取单菌落接种至细菌保存培养基斜面，每月转接1次，5代后应销毁。

■ 产品保存原理

冻存管里的小瓷珠表面多孔，细菌可以很方便的吸附在上面。冻存管接种上细菌后，可放置于-20℃或-80℃环境中长期保存（-20℃可保存一年，-80℃可保存二年）。当需要复苏菌株时，可以很方便的从冻存管中取出单个的小瓷珠，直接接种到合适的细菌培养基上（平板培养基或液体培养基）。

■ 菌株复苏

1、准备器材

相应的细菌增菌培养基、试管、接种环、试管架、镊子、酒精灯、酒精棉、记号笔等。

2、菌株复苏需要再无菌的条件下进行，操作环境符合相关标准。

3、操作方法

3.1 根据不同菌株的生长要求，配置相应的增菌液，分装试管中进行相应增菌液的灭菌温度进行灭菌，灭菌后在放置室温备用。

3.2 菌种管开启方法：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净菌种管；将菌种管顶端在火焰上加热，注意避免直接加热菌体或加热过度。

3.3 接种方式

3.3.1 增菌肉汤的制备：取出冻存管并用力摇晃，使管内瓷珠分散。无菌条件下拧开冻存管，用无菌的接种环（接种针）或镊子取出1个小瓷珠，拧紧瓶盖；将小瓷珠放置于灭菌后温度在室温的增菌液肉汤中。

3.3.2 划线接种：将手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约10公分，等待约10秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，取出冻存管并用力摇晃，使管内瓷珠分散。无菌条件下拧开冻存管，用无菌的接种环（接种针）取出1个小瓷珠或者菌液，拧紧瓶盖；将小瓷珠在相应的固体培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖1/3 培养基为止（I 区），灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自I区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）， 重复的动作完成 III 区与 IV 区。灼烧接种环，将接种环归位。

3.4 尽可能快地将冻存管放回原来的保存环境，温度过多改变将减弱细菌的生存能力；

3.5 培养箱中进行增菌肉汤及平板的培养根据细菌的要求培养：

  细菌要求在35+1℃培养，12~24小时；

  真菌要求在25+1℃培养，24~48小时；

  厌氧菌需要提供厌氧条件。

■ 菌株保存

1、瓷珠保存法：

1.1 使用前，用油性笔在每个冻存管上标记上细菌的名称，每支冻存管只可接种一种细菌；

1.2 在无菌条件下，打开冻存管的螺旋瓶盖；

1.3 用接种环挑取18-24小时新鲜细菌纯培养物，放入冻存液中。拧紧瓶盖，来回颠倒使细菌乳化，配成大约3-4麦氏比浊度的菌悬液，此时细菌悬液会吸附在小瓷珠内外表面；

1.4 用无菌移液器将冻存管中的菌悬液尽量吸出。（吸出的菌悬液应放入消毒液中并随后进行高压灭菌处理）；

1.5 拧紧瓶盖。记录下接种细菌的详细情况；

1.6 将接种完细菌的冻存管放在-20℃或-80℃冰箱中保存。

2、菌悬液保存法：

将复苏好的试管的菌悬液，用灭菌好的甘油进行封存后放置冰箱2~8℃进行保存，保存时间为1个月。

3、斜面保存法：

将菌悬液用划线方法进行斜面的接种培养后，用灭菌后的甘油进行保存放置冰箱2~8℃进行保存，保存时间为1个月。

■ 保存条件

1、未经使用的冻存管可在室温保存12个月；已经接种的冻存管在-20℃可保存12个月或-80℃可保存24个月；接种三次后冷藏保存，不可再冷冻保存；

2、在接种之前有如下情况产生，该冻存管不得使用：

a.瓶子有漏液情况发生；

b.冻存管内的冻存保护液混浊；

c.超过有效保存期。

3、小瓷珠一旦从冻存管中取出，不得再放回冻存管中；

4、当丢弃使用过的或部分使用过的冻存管时，应注意生物危险的预防。

5、废弃液经高压灭菌后（121℃，30分钟）丢弃。

■ 备注

1、菌株来源中国医学微生物菌种保藏管理中心的菌株干粉，菌株干粉默认为零代，对干粉菌株进行复活为第一代菌株，第一代菌株进行传代并保存为菌株的第二代即现在的磁珠。

2、菌株为第二代，保质期6个月，如发现污染或不活等现象，请1个月内联系我公司。

3、菌株操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。

4、本方法仅供参考，视情况可以通过其他合理途径进行传代和保存。

5、本公司出售的菌株仅用于科研、教学及卫生微生物检验质量控制。