■ 基本信息
别名: | pUC-18 |
启动子: | Lac/lac promoter |
复制子: | pUC |
质粒大小: | 2686bp |
质粒标签: | LacZ |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37度 |
5'测序引物: | M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT |
3'测序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
■ 质粒属性
质粒宿主: | 大肠杆菌 |
质粒用途: | 基因模板 |
片段类型: | cDNA
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片段物种: | 空载体
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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荧光标记: |
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■ 质粒简介
pUC18是适合于双脱氧法DNA测序的载体，通常运用于重组dna的分子克隆中，首先我们制备大肠杆菌的感受态细胞（能接受外来重组的dna），这种感受态菌株必须不同外来DNA分子发生遗传重组，通常是rec基因缺陷型的突变体，同时它们必须是限制系统缺陷或限制与修饰系统均缺陷的菌株，即具有这三种缺陷（rk mk rec ），同时对氨苄青霉素敏感（ap）。
puc18载体自身带有抗氨苄青霉素基因，而外源片段不具有，这样只有带有puc18的转化子的菌株才能在氨苄青霉素平板上存活，而外源片段自身环化的不能存活，这称为抗性筛选。
pUC18 上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N 端146 个氨基酸的编码序列，在这个编码区中插有一个多克隆位点，且不影响正常功能，DH5α感受态菌株带有β-半乳糖苷酶C 端部分序列的编码信息，当puc18载体在正常情况下同感受态菌株融合后，互补表达有活性的β-半乳糖苷酶，称为α-互补现象，当有外源片段插入多克隆位点后，不能产生互补，即细菌不能产生β-半乳糖苷酶活性。在呈色底物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷酶）和诱导物IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）的存在下，互补产物菌落呈现蓝色，不互补产物菌落呈白色，很容易鉴别，这种筛选方法称为α-互补现象筛选(蓝白斑筛选)。由上可见，puc18载体除了能重组导入外源片段外，在筛选表达过程中还具有重要的作用。质粒只保证关键序列正确，不保证表达效果。
■ 质粒图谱
■ 质粒序列
质粒序列可参考（具体以测序为准）下载：
ZK110 pUC18大肠克隆质粒.txt
