■ 基本信息
别名: | pET47b |
启动子: | T7 |
复制子: | pBR322 |
终止子: | T7 terminator |
质粒分类: | 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒 |
质粒大小: | 5203bp |
质粒标签: | N-6×His, C-S, C-Thrombin |
原核抗性: | Kan |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37℃，有氧，LB |
表达宿主: | BL21(DE3) |
诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
3'测序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
■ 质粒属性
质粒宿主: | 大肠杆菌 |
质粒用途: | 蛋白表达 |
片段类型: | ORF
|
片段物种: | 空载体
|
原核抗性: | Kan |
真核抗性: |
|
荧光标记: |
|
■ 质粒简介
pET47b载体携带有N端His纯化标签，紧跟着有一个HRV 3C蛋白酶切位点。这个HRV 3C蛋白酶切位点能够特异性的高效 切割 “LEVLFQ↓GP”氨基酸序列，酶活力在低温下很强。pET-50b(+)载体上还含有一个可选择的C端Thrombin蛋白酶切位点和S标签序列。
pET-47b(+)载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒 粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列的作用下终止蛋白翻译。质粒只保证关键序列正确，不保证表达效果。
■ 质粒图谱
■ 质粒序列
质粒序列请下载：
ZK187pET-47b大肠表达质粒.txt
