■ 基本信息
别名: | pColdGST |
启动子: | CSPA |
复制子: | pBR322 |
质粒分类: | 大肠杆菌载体；pCold系列表达质粒 |
质粒大小: | 5097bp |
质粒标签: | N-GST, N-HRV 3C蛋白酶切位点,N-His |
原核抗性: | Amp |
克隆菌株: | DH5a |
培养条件: | 37度 |
表达宿主: | 大肠杆菌 |
培养条件: | 37℃，有氧，LB |
诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
5'测序引物: | pCold Forward:5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3 |
3'测序引物:
| pCold Reverse 5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3 |
功能简介: | pCold-GST载体表达GST融合蛋白，GST标签可以提高目的蛋白的可溶性，提高目的蛋白的纯度。 |
■ 质粒属性
质粒宿主: | 大肠杆菌 |
质粒用途: | 蛋白表达 |
片段类型: | ORF
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片段物种: | 空载体
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原核抗性: | Amp |
真核抗性: |
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荧光标记: |
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■ 质粒简介
pCold GST DNA在冷休克载体的基础上，整合了来源于Schistosoma japonicum的谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases, GST)可溶性标签。通过GST在目的蛋白质N末端的融合表达，可提高融合蛋白质的稳定性和可溶性。本制品在cspA启动子的下游插入了5’非编码区（5’-UTR）、翻译增强元件（TEE）、His标签、GST标签和多克隆位点（MCS）（下图）。此外，在cspA启动子下游还插入了可以严格调控目的基因表达的lac operator。GST标签融合蛋白质可进行高亲和性纯化。在GST标签和多克隆位点（MCS）之间插入了高特异性HRV 3C Protease 的识别序列，可从融合蛋白质中去除标签。HRV 3C Protease的最适温度为4～5℃，可以在温和的条件下进行目的蛋白质的标签去除反应。pCold 系列载体的启动子是大肠杆菌来源的，所以大部分大肠杆菌都可以作为表达宿主使用。
■ 质粒图谱
■ 质粒序列
质粒序列请下载：
ZK1596 pCold-GST大肠表达质粒.txt
